肖昕1 张曼珂2 夏乐欢1 罗艳1 李勤1 李红姣1

郴州市科学技术局科技发展计划项目（ZDYF2020227）

1.郴州市第三人民医院医学检验中心 2.郴州市第三人民医院护理部

目的 探讨高效价、高纯度、生物活性好的抗淋病奈瑟氏菌的特异性鸡卵黄免疫球蛋白（immunoglobulin of yolk,IgY）应用酶联免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）检测淋病奈瑟氏菌的效果。方法 采用超声破碎、研磨破碎、共振裂解等方法裂解淋病奈瑟氏菌，筛选出最佳裂解抗原，然后将经甲醛灭活的全菌抗原或裂解抗原与佐剂充分乳化免疫产蛋母鸡；采用酶联免疫吸附试验检测水稀释后的IgY抗体效价变化；通过硫酸铵盐析，超滤法纯化抗体，并用十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝电泳法和二喹啉甲酸法测定抗体纯度和浓度，ELISA法评价IgY检测效果。结果 超声破碎法裂解的淋病奈瑟氏菌抗原浓度最高且蛋白条带最为完整；0.5 mL的1×109 CFU/mL灭活菌初次免疫4周后再次免疫的方案产生的抗体效价最高，可达1∶25 600。硫酸铵沉淀超滤纯化后的抗体纯度可达94%，浓度为27.02 mg/mL；建立的间接ELISA法制检测淋病奈瑟氏菌具有较高的特异性和敏感度。结论 基于IgY的ELISA法检测淋病奈瑟氏菌效果显著，可以提高制备抗体的敏感度。

淋病奈瑟氏菌;鸡卵黄抗体;免疫球蛋白;间接ELISA法;效能;价值